primer5入门级引物设计攻略-利来w66国际

primer5是分子生物学常用的引物设计软件,准确率高,操作性强,下面小编就如何利用primer5进行引物设计分享自己的心得,本篇较简单,适合初学者。

操作方法01

获取引物模板引物与模板一一对应,设计引物之前先要找到一段匹配的模板。以h9禽流感病毒ha基因为例,在ncbi上下载一个最新的病毒ha基因作为本经验所介绍的引物设计的模板。

02

新建打开primer5(小编的版本为英文版),依次点击“file”——“new”——“dna sequence”,新建操作界面。

03

输入模板基因复制基因模板后,使用键盘快捷键“ctrl v”将下载的引物模板粘贴到空白框内,然后选择“as is”,点击“ok”。

04

search primer找到界面左上角“function”——“ primer”,在新跳出的界面上点击“search”,需要设置相应的条件,才能开始搜索。

05

条件设置点击“search”后,又跳出一个界面,我们从上到下依次设置:“search for”选择“pcr primers”;“search type”选择“pairs”;“search ranges”要根据不同的情况而定,一般来说选择基因全长,如“1”——“1683”;“pcr product size”一般鉴定选择300-500,测序选择1200-1600,不能超过基因全长;“primer length”一般为20 (-)2。

06

点击两次“ok”条件设置完毕后,点击“ok”,跳出新的界面后再点击“ok”,最后跳出软件为你选择的按照合成率从高到底的全部引物序列。

07

引物选择将引物表与左侧表格结合起来进行引物的选择。从小编设计的引物表中看到,最高合成率为88,其对应的左侧表中均出现“dimer”和“cross dimer”,说明此引物不甚理想。最佳的情况为“hairpin”、“dimer”、“false priming”和“cross dimer”都不出现,也就是100合成率。

08

重新设置条件如何引物不甚理想,那么就需要重新设置引物的各个条件,尤其是“search ranges”的选择,需要我们再次点击“search ”,跳出条件设置界面后重新设置。

09

选择理想引物经过多次的不断更改和设置后,最终选出较为理想的一对引物,合成率最好在98以上,四种状况均不出现为好。


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